Miksi käytämme negatiivista kontrollia PCR: ssä?

Miksi käytämme negatiivista kontrollia PCR: ssä?
Anonim

Vastaus:

Katso alempaa

Selitys:

PCR toimii pois templaatti-DNA: sta. Sanotaan, että olet testaus HIV: lle (HIV on RNA-virus, mutta kun se menee soluun, se muuttuu DNA: ksi …. niin että tartunnan saaneessa solussa on HIV-DNA). Käytetyt alukkeet tuottavat tuotteen (amplikonin), joka vastaa osaa HIV-DNA: sta. Jos näet tämän amplikonin, sinulla on HIV-sekvenssi ….. mutta jos sinulla ei ole negatiivista kontrollia, sinulla voi olla kontaminaatiota.

PCR on erittäin herkkä. PCR: ssä on monia ratkaisuja (vesi, puskuri, dNTP, entsyymi) … ja kaikki ne voivat helposti saastua muista näytteistä peräisin olevalla DNA: lla tai jopa eilen tekemässä reaktiossa valmistetusta amplikonista. Joten jos sinulla on potilaan X: n DNA-näyte ja tarkistat HIV: n PCR: llä, PCR-alukkeet voivat tehdä tuotteen pois HIV-DNA: sta potilaan X: n DNA-näytteessä (jos kyseisellä henkilöllä on HIV), tai se voi tehdä sen pois saastuminen. Mutta et voi kertoa, onko se peräisin saasteista tai HIV: stä potilaiden DNA: ssa.

Joten suoritat vedenohjauksen. Tube 1 asetat kaikki reaktion komponentit ja DNA: lle lisätään vain vettä. Tämä on negatiivinen kontrolli. MITÄ ei pitäisi vahvistaa tätä. Putkessa 2 asetat kaikki reaktiokomponentit ja potilaan X: n DNA: n. Jos saat tuotteen täällä (eikä mikään putkessa 1), potilaalla X on todennäköisesti DNA: ssaan HIV-DNA. Jos saat tuotteen sekä putkessa 1 että putkessa 2, sinulla on saastumisongelma ja et voi kertoa, onko potilaan näytteessä oleva HIV peräisin taudista tai saastumisesta.

Joten käytät aina vedenohjausta (vettä DNA: n sijasta).