Mikä on western blotting?

Mikä on western blotting?
Anonim

Vastaus:

Vasta-aineiden käyttö havaitaan proteiineja, jotka on erotettu SDS-PAGE: lla ja siirretty sitten kalvoon.

Selitys:

Solut sisältävät proteiiniseoksen (monet tuhannet) ja nämä voidaan erottaa SDS-PAGE: lla.

SDS-PAGE: n proteiinit siirretään sitten sähkökentän avulla geelistä kalvoon, joka tyypillisesti valmistetaan nitroselluloosaksi tai polyvinylideenifluoridiksi (PVDF).

Kalvoa tutkitaan primäärisellä vasta-aineella, joka on spesifinen kiinnostavalle proteiinille. Sitten sekundääristä vasta-ainetta käytetään primäärisen vasta-aineen havaitsemiseksi. Toissijainen vasta-aine sisältää markkerin, joka voidaan havaita kemiallisella reaktiolla joko antamaan kalvolle näkyvän nauhan tai signaalin, jonka erikoiskamera voi siepata.

Tarvittaessa voin laajentaa tätä vastausta syvällisesti, kun olen esittänyt useita satoja Western blot -harjoituksia urani aikana.