Mikä on kromatografinen ioninvaihto? + Esimerkki

Mikä on kromatografinen ioninvaihto? + Esimerkki
Anonim

Vastaus:

Se on prosessi erilaisten proteiinien erottamiseksi niiden varauksen ja sitoutumisominaisuuksien perusteella materiaaliin.

Selitys:

Eri pH: ssa erilaiset proteiinit kantavat erilaisia maksuja. Asettamalla proteiiniseos asetetussa pH: ssa voi olla seos, joka sisältää proteiineja, joilla on erilaiset latausominaisuudet.

Jos tämä proteiiniseos kaadetaan kolonniin, joka sisältää materiaalin, jolla on varausta, pylväs sitoo proteiinit vastakkaisessa varauksessa.

Voit sitten käyttää erilaisia liuoksia, jotka sisältävät erilaisia määriä ioneja eluoimaan (irrottamaan) proteiinit pylväästä.

Sano esimerkiksi, että sinulla oli proteiinien seos, josta haluat puhdistaa tietyn proteiinin. Jos tiesit, että tietyllä pH: lla mielenkiinnon kohteena oleva proteiini latautui positiivisesti, voit kaataa seoksen kolonniin, joka sisälsi negatiivisesti varautunutta materiaalia.

Kaikki proteiinit, joilla ei ollut varausta tai negatiivisesti varautuneita, virtaisivat suoraan kolonnin läpi. Voit sitten vapauttaa positiivisesti varautuneen proteiinin tulvaamalla kolonnin positiivisilla ioneilla, jotka täyttävät negatiivisen varauksen sarakkeessa. Tämä kilpailu aiheuttaisi sitten proteiinin kiinnostuksen.

Tässä on esimerkki tästä.

Jokainen lokero sisältää puskurin eri konsentraatiossa ja kuten voidaan nähdä 175 mM näytteestä (vasemmassa yläkulmassa), hyvin pieni punainen / ruskea proteiini on sitoutunut varautuneeseen kalvoon, koska puskurissa olevien ionien välillä on kilpailua ja proteiinia kalvon varautuneisiin sitoutumiskohtiin (puskurin ionit ovat "voittaneet", koska niistä on enemmän ja siten ne ovat estäneet proteiinin sitoutumisen). Oikealla olevassa näytteessä on paljon proteiinia sitoutunut kalvoon, koska läsnä on vähemmän ioneja kilpailemaan sitoutumispaikoista.

Tässä videossa näet anioninvaihtokromatografian käytössä: