Miksi DNaasi ja lysotsyymi ovat lyysivaiheissa, joita käytetään proteiinin puhdistuksessa?

Miksi DNaasi ja lysotsyymi ovat lyysivaiheissa, joita käytetään proteiinin puhdistuksessa?
Anonim

Vastaus:

Proteiinifraktion puhdistaminen …

Selitys:

Jos puhdistat (usein spesifistä) proteiinia, sinun on päästävä eroon niin paljon roskaa kuin voit, jotka saattavat olla niihin sidottuja.

Se riippuu siitä, missä määrin olet proteiini, mutta yleensä se on hyvä idea, erityisesti preparatiivinen puhdistus, päästä eroon mahdollisimman monista epäpuhtauksista.

1:

Koska proteiinit ovat yleensä suuria, ja näin ollen ne näkyvät (ultrasentrifugoidun) fraktion alemmissa nauhoissa, haluat päästä eroon kaikista nukleidihapoista, varsinkin jos proteiini, jota olet puryfying, koskee samankaltaisia proteiineja. Pol1, Käänteinen transkriptaasi tai mikä tahansa muu entsyymi, joka liittyy replikointiin / transkriptioon / translaatioon.

Voit erottaa näytteessä olevat nukleiinihapot DNAseen avulla: tämä hydrolysoi DNA: n täysin sen osiin.

Pidä mielessäsi, että on olemassa erilaisia DNAseja, jotka kaikki eroavat niiden mekanismin ja spesifisyyden suhteen. Käytettävästä DNAseesta riippuen se voi myös näyttää endo- tai ekso- nukleaasiaktiivisuus …

Lisää kohtaan, RNaasia on sopivampi, koska RNA on tavallisesti enemmän proteiinien kelluvuus / fraktio-alueella, ja se voi olla sitoutunut proteiiniin.

2:

lysotsyymi: Entsyymi, jolla on vähintään kaksi toimintoa:

Se deglykosyloi entsyymejä: Useimmat verenkierrossa kuljetettavat proteiinit ovat glykosyloituja: niissä on muutama sokerimolekyyli. Lysotsyymi poistaa sokeritähteet.

Se kykenee myös hajottamaan Gram-Positive-bakteerien soluseinän, mikä aiheuttaa ne lyse. (jos haluat puhdistaa proteiinia grampositiivisista bakteereista)

Kaikki huonontuneet tuotteet, joko nukleiinihappo tai sokeriruiskut, näkyvät Centrifugaputken yläfraktioissa niiden "kevyemmän" kelluvuuden vuoksi.