Miksi GAPDH: ta käytetään Western Blotissa? + Esimerkki

Vastaus:

GAPDH: ta käytetään usein latausohjauksena.

Selitys:

Western blottingissa käytämme usein GAPDH: ta latausohjauksena. Tämä tarkoittaa sitä, että GAPDH: n koettelemalla voimme tarkistaa, että meillä on ladattu ekvivalenttinen määrä proteiineja blotin eri kaistoilla.

Esimerkki käyttötarkoituksesta - sanotaan, että meillä on sairaus, joka mielestämme aiheuttaa tietyn proteiinin kohoamisen solussa. Teemme näytteen "terveistä" soluista ja toisesta näytteestä "sairaista" soluista. Sitten lataamme ekvivalenttiset proteiinimäärät molemmista näytteistä geelille Western blotille.

Sen jälkeen kun on tutkittu kiinnostuksen kohteena olevan proteiinin blotti, havaitsemme, että sairaissa soluissa proteiinitaso on todellakin kohonnut (se on tummempi bändi tuotetaan blotilla). Todistaa, että tämä proteiinin lisäys johtuu solun ilmentymisen muutoksesta latausartikkelin sijasta (toisin sanoen enemmän instense-kaistaa aiheuttaa muutos proteiinien ilmentymisessä soluissa, eikä meitä vahingossa lataamalla enemmän "taudin" näytteestä kuin "terveestä"), me myös koettaisimme GAPDH: n blotin osoittamaan, että proteiinitasot ovat samoja molemmilla kaistoilla.

Täten tällä tavalla osoitamme, että vastaava proteiini on ladattu kahteen kaistaan ja että tarkkailemamme kaistan intensiteetin muutos johtuu kiinnostuksen kohteena olevan proteiinin ilmentymisen muutoksista.