Mitä ELISA-testissä tehdään, mitä primaariset vasta-aineet ja sekundaariset vasta-aineet tekevät?

Mitä ELISA-testissä tehdään, mitä primaariset vasta-aineet ja sekundaariset vasta-aineet tekevät?
Anonim

Vastaus:

Tämä riippuu ELISA-määrityksen tyypistä.

Selitys:

ELISA = Entsyymiin liittyvä immunosorbenttimääritys.

ELISA-määrityksiä on erilaisia. Mitä tarvitset:

  • vasta-aineen kanssa
  • antigeeni, johon vasta-aine sitoutuu
  • entsyymin substraatti, joka aiheuttaa mitattavissa olevan reaktion

entsyymi vasta-aineeseen kiinnitettynä on usein HRP (piparjuuriperoksidaasi). HRP voi reagoida eri substraattien kanssa, jotka joko muuttavat väriä tai säteilevät valoa, molemmat mitattavissa.

Kuva näyttää yleiskuvan eri tyyppejä ELISA-määrityksistä. Selitän, miten he toimivat alla.

Suora ELISA

Levy päällystetään antigeenillä (Ag) ja a primaarinen vasta-aine lisätään entsyymiä. Kun substraatti lisätään, reaktio tapahtuu ja on verrannollinen vasta-aine-antigeenin vuorovaikutuksiin.

Epäsuora ELISA

Jälleen levy on päällystetty antigeenillä ja a primaarinen vasta-aine sitoutuu antigeeniin. sekundaarinen vasta-aine lisätään joka sitoutuu ensimmäiseen vasta-aineeseen. Toinen vasta-aine sisältää entsyymin, joka reagoi substraatin kanssa.

Sandwich-ELISA

Tässä on mukana kaksi tai kolme vasta-ainetta. Tartunta-vasta-aine on kiinnitetty levyihin ja sitoutuu antigeeniin. Tätä seuraa samoja vaiheita kuin joko suora (vain yksi vasta-aine) tai epäsuora menetelmä (kaksi vasta-ainetta).

Kilpailukykyinen ELISA

Joskus sitä kutsutaan inhibitio-ELISA: ksi, on hieman monimutkaisempi. Levy on päällystetty tutkittavalla antigeenillä. primaarinen vasta-aine entsyymin kanssa inkuboidaan ensin näytteen kanssa, jolla on saman antigeenin tuntematon pitoisuus. Tämä lisätään sitten levylle, jolloin vasta-aineet, jotka ovat vielä vapaita reagoimaan levyn antigeenin kanssa, sallitaan. Sen jälkeen, kun näytteen vasta-aine-antigeenikompleksit pestään substraatista, lisätään se.

Kun tuntemattomalla näytteellä on paljon antigeeniä, vasta-aineen vapaata sitoutumista levylle = pienempi signaali on vähemmän.